当前位置:文库下载 > 所有分类 > 多管发酵法与滤膜法在实际中的应用
免费下载此文档侵权投诉

多管发酵法与滤膜法在实际中的应用

介绍滤膜法和多管发酵法测定水中大肠杆菌的原理,步骤,应用及优缺点的比较。

科技情报开发与经济

文章编号:1005-6033(2009)17-0208-02

SCI-TECHINFORMATIONDEVELOPMENT&ECONOMY2009年第19卷第17期

收稿日期:2009-04-13

多管发酵法与滤膜法在实际中的应用

(山西省环境监测中心站,山西太原,030027)

摘要:阐述了多管发酵法与滤膜法的基本原理及使用这两种方法应注意的事项,对

多管发酵法与滤膜法进行了比较,得出滤膜法具有省时、省料、设备要求低等优点,可以采集较多的检测水样的结论。关键词:多管发酵法;滤膜法;检测水样中图分类号:X824文献标识码:A

水中病原微生物对人体健康形成的危害历史悠久,受病原

微生物污染的水体中含有大量的致病菌、病毒等,可引起伤寒、痢疾、霍乱和腹泻等肠道疾病,历史上也发生过一些大城市因水源水质受到污染而造成的致命传染病的爆发和蔓延。虽然人们现在通过采用加氯消毒的方式,已基本上控制了水致传染病的问题,但随着水体中不断发现新的病原微生物,病原微生物至今仍是威胁人类健康和生命的重要因素。因此,水的细菌学测定,

环境卫生监督等方面特别是肠道菌群的检验,在环境质量评价、

具有重要的意义。

目前,在实际工作中经常以检查水的细菌总数,特别是检查作为粪便污染的指示菌来间接判断水体污染状况和环境卫生学质量。粪便污染指示菌一般是指如有该指示细菌存在于水体中,即表示水体曾有过粪便污染,也就有可能存在肠道病原微生物,那么该水质在卫生学上是不安全的。

粪大肠菌群作为常见的指示细菌,是总大肠菌群的一部分,可以准确地反映出水质受污染的情况,目前对其的检测主要采用多管发酵法和滤膜法。

玫瑰酸盐试剂的选择性作用,在M—FC培养基上很少见到非粪大肠菌菌落。

2

2.1

使用两种方法的注意事项

1

1.1

两种方法的基本原理

多管发酵法

初发酵实验。发酵管内装有单倍或三倍乳糖蛋白胨培养液,并在内倒置有小玻璃管。每个样品用3个不同的水样量接种,同一接种水样量要有5管,将水样分别接种到装有乳糖蛋白胨培

)℃下培养(24±2)h。乳糖能起选择养液的发酵管中,在(37±0.5

作用,因为很多细菌不能发酵乳糖,而大肠菌群能发酵乳糖并产产气。培养液中加入溴甲酚紫作为酸度指示剂,细菌产酸后,酸、

培养液即由原来的紫色变成黄色。产酸产气的发酵管表明试验阳性,如在倒管内产气不明显,可轻拍发酵管,有小气泡升起为阳性。

复发酵实验。轻微振荡初发酵试验阳性结果的发酵管,用3

(2环~3环)转接到EC培养液中,在(44.5±mm接种环将培养物

0.5)℃下培养(24±2)h(提高培养温度不利于来自自然环境的大肠菌群的生长)。培养后立即观察,发酵管产气则证实为粪大肠菌群阳性。1.2滤膜法

滤膜是一种微孔性滤膜,孔径0.45μm。将水样注入已灭菌的放有滤膜的过滤器中,经过抽滤,细菌即被截留在膜上,然后将滤膜贴于M—FC培养基上,在(44.5±0.5)℃下培养(24±2)h。粪大肠菌群菌落在M—FC培养基上呈蓝色或蓝绿色,其他非粪大肠菌群菌落成灰色、淡黄色或无色。正常情况下,由于温度和208

培养温度的要求

总大肠菌群中的细菌除生活在肠道中外,在自然环境中的水与土壤中也经常存在,但此等在自然环境中生活的大肠菌群

但培养的最合适温度为25℃左右,如在37℃培养则仍可生长,

如将培养温度再升高至44.5℃,则不再生长,而直接来自粪便的大肠菌群细菌,习惯于37℃左右生长,如将培养温度升高至44.5℃仍可继续生长。因此,可用提高培养温度的方法将自然环境中的大肠菌群与粪便中的大肠菌群区分,两种方法也都基于此理。将接种好的样品或装有滤膜的培养基放入生化培养箱时,箱内温度一定要达到所要求的温度(44.5±0.5)℃时,方可放入。如用恒温水浴箱时,其水面要高于接种物面,放滤膜的培养皿要沉到水浴箱底部。2.2加氯水样的处理

经氯处理消毒过的水样,水中含有一定量的余氯,使大肠菌群处于受损或受抑制状态,在采集水样时应提前在采样瓶中加硫代硫酸钠。硫代硫酸钠可以脱氯,使受损的细菌得以复苏与修复,从而避免出现计数结果偏低甚至假阴性的现象。此外余氯对滤膜法培养的细菌其抑制作用尤为明显,所以抽滤时应对水样进行大量无菌水稀释,以减少余氯的残留。2.3样品的保存

采样用的容器使用前应盖好瓶盖,用牛皮纸将瓶盖和瓶颈

或用高压蒸汽处包裹好,置干燥箱160℃~170℃干热灭菌2h,

灭菌器121℃灭菌15min。采样后水样的正确保存也很重要,如保存不当可使样品中的大肠菌群细菌死亡或在一定条件下再生长,这些都将影响检测结果的准确性。检测室接到水样后,应立即检测,如因故不能检测时,应立即将样品置于冰箱内(2℃~10)并于2h内检测。℃

2.4培养物质的制备与保存

(1)多管发酵法所使用的培养液在分装于各发酵管中后,应

(注将发酵管尽快放于高压蒸汽灭菌器中,在115℃灭菌20min

意:这个温度也应控制好,既达到灭菌的作用,还要防止培养物质分解流失),然后贮存于冰箱或暗处备用。

(2)滤膜法所采用的M—FC培养基多使用外购的成品,培养基中苯胺蓝的纯度和质量往往影响菌落的颜色,因此,无菌包装的成套培养基在使用前,最好先接种典型粪大肠菌,以观察对比菌落的颜色,以此来鉴定其稳定性。

第1页

免费下载Word文档免费下载:多管发酵法与滤膜法在实际中的应用

(下载1-2页,共2页)

我要评论

返回顶部