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可溶性抗原制备

可溶性抗原制备

蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原,免疫前常需纯化。

(一)组织和细胞抗原的制备

1.组织和细胞抗原的制备:通常需要先将来源于人和动物的组织和细胞破碎,再经一定的方法纯化,才能获得所需的抗原。细胞破碎方法有:

(1)高速组织捣碎机法;

(2)研磨法(可用组织匀浆器或乳钵) 组织匀浆液要离心沉淀,沉淀物为组织和细胞碎片,上清液为提取可溶性抗原的材料。

2.组织细胞或培养细胞可溶性抗原制备:除上述机械捣碎获取外,尚有酶处理法,常用胃蛋白酶或胰酶,可获得游离的单个细胞。

细胞抗原分膜蛋白抗原、细胞质抗原(主要为细胞器)、细胞核与核膜抗原,制备这些抗原前均需将细胞破碎,方法有:

(1)反复冻融法:一般-20℃反复冻融。

(2)超声破碎法:利用超声波机械振动原理使细胞破碎。

(3)自溶法:利用组织、细菌自身酶系统使之裂解。

(4)酶处理法:常用溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶等使细菌或组织裂解。

(5)表面活性剂处理法:常用十二烷基硫酸钠等表面活性剂处理。

(二)超速离心分离法

用于分离亚细胞成分和蛋白质,是进一步纯化的第一次过筛。可分下列方法:

1.差速离心法:低速离心高速离心交替进行,分离大小差异的抗原颗粒;

2.梯度密度离心法:是一种区带分离法,通过梯度密度离心,使各类分子量的颗粒得以分离,也可以采用梯度柱的形式分离。 超速离心分离或梯度密度离心仅适用于少数大分子抗原及一些比重较轻的抗原,而不适用于大多数中、小分子抗原。

(三)选择沉淀法

选择沉淀法是采用各种沉淀剂或某些条件使抗原成分沉淀的方法。

1.核酸去除法:可采用氯化锰、硫酸鱼精蛋白等核酸提取沉淀剂,而核糖核酸降解法更简便(采用DNA或RNA酶);

2.盐析沉淀法:常采用硫酸铵使蛋白抗原进行粗筛、提取丙种球蛋白及抗原浓缩;

3.有机溶剂沉淀法:常采用乙醇或丙酮;

4.水溶性非离子型聚合物沉淀法:常用非离子型聚合物为分子量为2000~6000的聚乙二醇(PEG)。

(四)凝胶过滤法

又称分子筛层析。通过凝胶分子筛作用,可将大、中、小三类分子分开,选择凝胶柱时应注意选用适于分离范围内的凝胶。

(五)离子交换层析法

离子交换层析是利用一些带电离子基团的凝胶或纤维素医学教*育网整理,吸附带有相反电荷的蛋白质抗原。常用的离子交换剂有:

1.具有离子交换基团的纤维素。

2.具有离子交换基团的交联葡萄糖、琼脂糖、聚丙烯酰胺。

3.被覆以离子化物质的细粉。

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