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尿液蛋白质分离检测及临床意义的研究进展

2010—12胃

第16卷4期

天津医科大学学报

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V01.16,No.4Dec.2010

701

尿液蛋白质分离检测及临床意义的研究进展

王洪礼,宁莉综述,魏殿军审校(天津医科大学第二医院检验科,天津300211)

[关键词】微量白蛋白尿;非免疫活性尿蛋白;高效液相色谱法[中图分类号]R446.12

[文献标识码】A

[文章编号]1006—8147(2010)04-0701-03

尿液蛋白检测及特性的鉴定对评价泌尿系统的

功能和疾病非常重要。尿蛋白含量的检测方法很多,

液中大量存在,其分子与人血清白蛋白的大小相同,利用传统的抗人血清白蛋白抗体法不能检测出来。它们由多肽链组成,可被蛋白酶水解,其间通过二硫

键和非共价键连接。这些白蛋白很可能是在通过肾

因检测方法和技术特性不同,其对尿蛋白的敏感性和特异性也不同。以往采用免疫化学方法检测尿微量白蛋白(mAlb)对肾脏损害作评价较尿常规、肾功能检查敏感,已被临床医生接受Il】。近来国外有报道发现用高效液相色谱(HPLC)法测定尿中非免疫活性白蛋白(INUA)能更早期地提示糖尿病肾脏损害,

而采用常规免疫化学法不能测定之。因此,现阶段如

脏的过程中形成,但也不排除血中含有少量该物质并被肾脏清除。研究表明,糖尿病人由无蛋白尿进展至微量蛋白尿期,尿中非免疫活性蛋白水平逐渐增高。Osicka等【41对糖尿病人尿液非免疫活性白蛋白检

测后发现该指标可将l和2型糖尿病人出现持续性蛋白尿的危险性预测分别提前3.9年和2.4年。2尿液蛋白质分离技术

尿液蛋白质分离通常采用双向聚丙烯酰胺凝胶

何更好地分离和筛选尿蛋白检测指标对临床相关疾

病的诊断具有非常重要的意义i2l。l尿液蛋白质的分类和临床特性

尿液中的蛋白质是非常复杂的,它们以多种形式存在。传统意义上,根据蛋白分子量的不同,将尿蛋白分为小分子蛋白(B:一微球蛋白、仅。一微球蛋白、视黄醇结合蛋白)、中分子蛋白(白蛋白、转铁蛋白)、大分子蛋白(IgG、IgA、IgM、仅2.巨球蛋白)。近年来,

根据尿白蛋白的免疫活性又将其分为有免疫反应活性的白蛋白和非免疫活性白蛋白两类。而利用蛋白质组学方法可鉴定出来的尿蛋白质有171个,这包括5个男性特异性蛋白质——前列腺特异性抗原、前列腺酸性磷酸酶前体、前列腺分化因子、精子形成蛋白I和精子形成蛋白Ⅱ的前体,同时还鉴定出12个低分子量蛋白质(<10kDa)。蛋白质组学方法鉴定出来的尿蛋白质大部分分子量范围为30~60等电点范围为4~1lY31。

临床上最常用的尿液蛋白质的检测方法是免疫

kDa,

电泳和毛细管电泳,此外用于蛋白质组分离的技术还有二维层析、荧光差异显示双向电泳、二维液相分离和同位素亲和标记等方法。

2.1双向聚丙烯酰胺凝胶电泳(2-DE)是使用最

广泛的蛋白质分离技术,具有很高的分辨率,已经成为蛋白质组研究中的核心技术之一。其原理是根据蛋白质的等电点和分子量的差异使之在二维平面上分开。目前,最多可分离到11000个左右蛋白样点。

尽管双向电泳技术近几年已经取得了突破性进展,

是当前蛋白质分离的最常用技术,但其本身还有一些难以克服的问题∞。

2.2毛细管电泳(CE)其中应用较为广泛的是毛

细管区带电泳(CZE)(依据不同蛋白质的电荷质量

比的差异实现分离)、毛细管等电聚焦(依据蛋白质

等电点不同在毛细管内形成pH梯度而实现分离)和毛细管电色谱(毛细管电泳和液相色谱的融合技术)。CE具有灵敏度高、稳定性好、分离自动化和成本消耗少等优点。毛细管电色谱是近年发展起来的

一种新型微分离分析技术,它整合了毛细管电泳与

比浊法(RIA)。近年来发现HPLC法测定的白蛋白总

量远超过RIA法测定的白蛋白浓度,因而推断有大

量其他形式的白蛋白存在,其中包括非免疫活性白蛋白。非免疫活性白蛋白也是人体白蛋白成分,在尿

作者简介王洪礼(1961一),男。主管技师,研究

向:临床生物化学;

微径柱液相色谱的优点,通过在填充微细颗粒液相色谱填料的微径柱色谱柱两端施加直流高压电场,

通讯作者:魏殿军,E—mail:weidi酬un@gmail.com。

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