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Calibrite微球演示双参数获取和分析

流式细胞仪BD FACS Aria操作规程

Calibrite微球演示双色样本的获取和分析

㈠ 样本制备(2管):

① 1ml鞘液(未标记微球一滴);――演示同型对照样本

② 1ml鞘液(未标记、FITC微球各一滴);――演示FITC单染补偿管;

③ 1ml鞘液(未标记、PE微球各一滴);――演示PE单染补偿管;

④ 将②③中的样本各取200微升混合,演示双染样本。

㈡ 流式上机检测:

1、在“浏览框(browser)”中建文件夹,实验组,样本和采集管并重命名(选中后,点右键重命名)。

2、将“浏览框”的采集箭头选中采集管,点击“仪器框(instrument)”的参数parameter页面,删除不必要的荧光参数,仅保留FITC和PE,散射光参数选择线性,荧光参数选择对数,所有参数均选择A面积信号。

3、在“通用工作页面(Global sheet)”上建获取模板:

画2个散点图。

① 第一个图,横轴FSC-A,纵轴SSC-A,圈定单个微球的矩形门P1;

② 第二个图,横轴FITC-A,纵轴PE-A,选中该图后:

单击右键,在“Show Population”下选中P1,即仅显示P1门内的颗粒。 单击右键,选择“Show Population Hierarchy”。

单击右键,选择“Creat Statistics View”生成统计框,右键单击统计图,选择“Edit Statistics View”,选择相应荧光参数的mean。

选中这两个图,单击“信息查看框”的“Title”页面,选中“Tube”和“Population”复选框。

③ 定义每个样本管的参数标志,参数标志将显示在数据图的坐标轴上和统计表中。 选择Experiment>Experiment Layout路径

在出现的对话框中的“Label”一栏中,输入每管正确的荧光标志。比如,在FITC区域中输入CD3;用Tab键或鼠标转换输入区域。

在“Acquisition”一栏中,输入每管要获取的微粒总数10000个。

Calibrite微球演示双参数获取和分析

4、手动脱机补偿及上机检测:

① 放第一管同型对照管在流式细胞仪上:

⑴ 确认绿色的数据采集箭头指向该管,点击“Load”上样,看通用工作页面的散射

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